Rab GDI α Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404659

Panoramica

GDI1 codifica l’inibitore della dissociazione del GDP di Rab alfa (Rab GDI α), uno chaperone citosolico che si lega alle Rab GTPasi prenilate e ne regola l’estrazione dalle membrane, la solubilizzazione e il riciclo tra compartimenti donatori e accettori. Controllando disponibilità e localizzazione delle Rab, Rab GDI α contribuisce a coordinare la gemmazione, il traffico e la fusione delle vescicole lungo le vie endocitiche e secretorie, sostenendo l’identità degli organelli e lo smistamento del carico. L’alterazione di GDI1 perturba le reti di traffico dipendenti da Rab, fondamentali per il ciclo delle vescicole sinaptiche e l’omeostasi neuronale, collegando un trasporto di membrana compromesso a fenotipi di malattie neuroevolutive e neurologiche. In quanto nodo centrale nella regolazione delle piccole GTPasi, GDI1 è spesso studiato nel contesto della dinamica degli endosomi, del trasporto dal Golgi alla membrana plasmatica e della funzione sinaptica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Rab GDI α (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene GDI1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del GDI1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto GDI1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Rab GDI α.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di GDI1 per lo studio della segnalazione di Rab GDI α, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni GDI1 critici per la funzione di Rab GDI α
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di GDI1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Rab GDI α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Rab GDI α CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus GDI1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Rab GDI α Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Rab GDI α (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia GDI1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio GDI1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.