Rab 5A Plasmide Double Nickase (h): sc-417949-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rab 5A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rab 5A Double Nickase Plasmid (h) e il Rab 5A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RAB5A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rab 5A Antibody (C-3): sc-515401
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rab 5A Plasmide Double Nickase (h) | sc-417949-NIC | 20 µg | $410.00 |
RAB5A codifica Rab 5A, una piccola GTPasi che agisce da regolatore principale dell’endocitosi precoce e del traffico di membrana endosomiale. Nello stato legato al GTP, Rab 5A coordina l’internalizzazione mediata da clatrina, la fusione degli endosomi precoci e lo smistamento del carico reclutando effettori che controllano l’ancoraggio delle vescicole e la segnalazione dei fosfoinositidi. Attraverso questi ruoli influenza il turnover dei recettori e la dinamica della trasduzione del segnale in diverse vie, come il traffico dei recettori dei fattori di crescita e la maturazione degli endosomi. Un’attività o un’espressione deregolate di RAB5A sono state collegate ad alterazioni dei programmi di trasporto intracellulare osservate nell’invasione delle cellule tumorali, in fenotipi neurodegenerativi e nei meccanismi di ingresso dei patogeni, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sul traffico di membrana e sulla segnalazione.
Rab 5A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RAB5A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RAB5A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RAB5A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RAB5A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.