PTP1B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400732-LAC

PTPN1 codifica la proteina tirosina fosfatasi 1B (PTP1B), una fosfatasi associata al reticolo endoplasmatico che defosforila i recettori tirosin-chinasici attivati e importanti intermedi della segnalazione. Attenuando la segnalazione del recettore dell’insulina e di IGF1R, PTP1B modula l’output delle vie PI3K–AKT e MAPK, plasmando il metabolismo cellulare, la risposta ai fattori di crescita e la segnalazione da stress. PTP1B influenza inoltre la segnalazione delle citochine e quella correlata a JAK/STAT tramite la defosforilazione di specifici substrati, collegando il turnover della fosfotirosina ai processi infiammatori e di regolazione immunitaria. Un’attività deregolata di PTPN1/PTP1B è stata implicata in fenotipi metabolici, nel rimodellamento della segnalazione associata al cancro e in alterazioni della segnalazione immunitaria, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per l’analisi delle vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale PTP1B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PTPN1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PTP1B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PTPN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PTP1B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PTPN1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.