PTPσ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402631-ACT

PTPRS codifica la proteina tirosina fosfatasi recettoriale di tipo S (PTPσ), una fosfatasi di tipo recettoriale che modula la segnalazione dipendente dalla fosforilazione alla superficie cellulare. PTPσ partecipa all’adesione cellulare, alla guida assonale e all’organizzazione delle sinapsi integrando segnali provenienti dalla matrice extracellulare e dai proteoglicani con vie intracellulari mediate da chinasi che controllano la dinamica del citoscheletro e la crescita dei neuriti. Nel sistema nervoso, alterazioni della segnalazione di PTPσ sono state associate a risposte rigenerative compromesse e al rimodellamento sinaptico, mentre in ambito oncologico la disregolazione di PTPRS è stata collegata a una segnalazione dei fattori di crescita perturbata e a cambiamenti nella migrazione cellulare. Queste caratteristiche biologiche rendono PTPRS un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione fosfotirosinica che regolano differenziazione, connettività e fenotipi invasivi in modelli cellulari umani.

PTPσ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTPRS senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PTPσ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTPRS nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRS, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PTPσ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTPRS nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PTPσ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PTPσ nelle cellule tumorali con espressione di PTPRS silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.