PTP-H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404194

概要

PTPN3は、非受容体型プロテインチロシンホスファターゼであるPTP-H1をコードしており、受容体型および非受容体型の基質に存在するホスホチロシン残基を脱リン酸化することで、キナーゼシグナル伝達を拮抗的に調節する細胞質内レギュレーターです。チロシンリン酸化の動態を調節することにより、PTP-H1は細胞増殖、接着、ならびに細胞骨格の再構築を制御する経路に影響を与え、MAPKをはじめとするリン酸化依存性のシグナル伝達ネットワークに下流効果を及ぼします。PTPN3の活性や発現の変化は、がん関連の状況におけるシグナル伝達の破綻や、異常な遊走・浸潤に結び付く細胞表現型に関与すると示唆されています。シグナル伝達の結節点として、PTP-H1は、がん化経路のチューニングや、状況依存的な受容体シグナル出力の制御への寄与という観点から、しばしば研究対象となっています。

PTP-H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPTPN3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PTPN3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PTPN3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PTP-H1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PTP-H1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PTPN3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PTP-H1の機能に不可欠なPTPN3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PTPN3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PTP-H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPTP-H1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PTPN3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PTP-H1 HDRプラスミド（h）および PTP-H1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPTPN3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPTPN3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。