PTP-H1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404194

Panoramica

PTPN3 codifica la fosfatasi tirosinica proteica non recettoriale PTP-H1, un regolatore citosolico che controbilancia la segnalazione mediata da chinasi defosforilando i residui di fosfotirosina su substrati recettoriali e non recettoriali. Modulando la dinamica della fosforilazione su tirosina, PTP-H1 influenza vie che controllano la crescita cellulare, l’adesione e il rimodellamento del citoscheletro, con effetti a valle su MAPK e su altre reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di PTPN3 sono state implicate in una trasduzione del segnale deregolata in contesti legati al cancro e in fenotipi cellulari associati a migrazione e invasione aberranti. In quanto nodo di segnalazione, PTP-H1 è spesso studiata per il suo contributo alla modulazione fine delle vie oncogeniche e al controllo, dipendente dal contesto, degli output di segnalazione dei recettori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PTP-H1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PTPN3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PTPN3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PTPN3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PTP-H1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PTPN3 per lo studio della segnalazione di PTP-H1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PTPN3 critici per la funzione di PTP-H1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PTPN3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PTP-H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PTP-H1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PTPN3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PTP-H1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PTP-H1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PTPN3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PTPN3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.