PSS1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404364-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PSS1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PSS1 Double Nickase Plasmid (h) e il PSS1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PTDSS1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PSS1 Antibody (B-5): sc-515376
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PSS1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404364-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PSS1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404364-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTDSS1 codifica la fosfatidilserina sintasi 1 (PSS1), un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza reazioni di scambio di base per generare fosfatidilserina a partire dalla fosfatidilcolina. Controllando l’abbondanza cellulare di fosfatidilserina, PSS1 contribuisce a regolare la biogenesi delle membrane, il traffico vescicolare, lo scambio lipidico mitocondrio–RE e la segnalazione apoptotica legata all’esternalizzazione della fosfatidilserina. L’attività di PTDSS1 si integra con reti metaboliche più ampie di fosfolipidi e sfingolipidi che determinano l’identità degli organelli e la trasduzione del segnale. Un’omeostasi della fosfatidilserina alterata è stata associata a perturbazioni della funzione neuronale e a patologie correlate alle membrane, a supporto di PTDSS1 come bersaglio per studi meccanicistici dei fenotipi cellulari guidati dai lipidi.
PSS1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PTDSS1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PTDSS1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PTDSS1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PTDSS1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.