PSS1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422474-ACT

Il gene murino **Ptdss1** codifica la **fosfatidilserina sintasi 1 (PSS1)**, un enzima di membrana del reticolo endoplasmatico che catalizza la biosintesi della fosfatidilserina tramite reazioni di scambio di basi, contribuendo a definire il profilo dei fosfolipidi cellulari. La fosfatidilserina sostiene la curvatura di membrana e la funzione dei siti di contatto tra organelli, e la sua distribuzione asimmetrica contribuisce al traffico vescicolare, alla segnalazione apoptotica e al riconoscimento immunitario delle cellule morenti. Attraverso il suo ruolo nell’omeostasi lipidica, PSS1 influenza la funzione mitocondriale, l’autofagia e reti più ampie di segnalazione lipidica che si interfacciano con le risposte allo stress e il rimodellamento metabolico. La disregolazione del metabolismo della fosfatidilserina è stata associata a fenotipi neurologici e metabolici, rendendo **Ptdss1** un nodo utile per analizzare meccanismi dipendenti dai lipidi in modelli rilevanti per la malattia.

PSS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ptdss1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSS1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ptdss1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ptdss1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSS1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ptdss1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSS1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSS1 nelle cellule tumorali con espressione di Ptdss1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.