PSGL-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401534-ACT

SELPLG codifica il ligando glicoproteico della P-selectina-1 (PSGL-1), un recettore di adesione di tipo mucinico espresso in modo marcato sui leucociti, che media l’adesione iniziale (tethering) e il rotolamento sull’endotelio attivato attraverso il legame con le selectine. PSGL-1 integra motivi di riconoscimento dipendenti dalla glicosilazione con la segnalazione intracellulare per coordinare il traffico leucocitario, la formazione della sinapsi immunologica e il reclutamento infiammatorio. Questo asse si interseca con l’infiammazione vascolare e con la regolazione dell’immunità innata e adattativa, influenzando vie che modellano le risposte citochiniche e le interazioni cellula–cellula. Una funzione e/o un’espressione disregolate di SELPLG/PSGL-1 sono state associate a fenotipi infiammatori e autoimmuni, nonché alle dinamiche del microambiente tumorale–immunitario, rendendolo un nodo rilevante per studi meccanicistici in immunologia e oncologia.

PSGL-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SELPLG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSGL-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SELPLG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SELPLG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSGL-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SELPLG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSGL-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSGL-1 nelle cellule tumorali con espressione di SELPLG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.