PRX2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422788-ACT

Mouse Prrx2 codifica PRX2, un fattore di trascrizione homeobox correlato ai paired, che regola programmi genici coinvolti nel controllo dell’identità mesenchimale, nella specificazione del destino cellulare e nel patterning dei tessuti durante lo sviluppo. PRX2 partecipa a reti trascrizionali che coordinano processi associati alla transizione epitelio–mesenchimale (EMT), il rimodellamento della matrice extracellulare e il comportamento migratorio, con effetti a valle sulla differenziazione e sulle risposte stromali legate alla riparazione delle ferite. Un’attività di PRRX2 deregolata è stata collegata in letteratura ad alterazioni dell’impegno di linea e a fenotipi invasivi in contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studiare la plasticità trascrizionale. In quanto proteina nucleare legante il DNA, PRX2 è spesso studiata per comprendere come integri i segnali dello sviluppo con il controllo trascrizionale dipendente dallo stato della cromatina.

PRX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Prrx2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRX2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Prrx2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Prrx2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRX2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Prrx2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRX2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRX2 nelle cellule tumorali con espressione di Prrx2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.