PRX V Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402681-ACT

A peroxirredoxina 5 (PRDX5; PRX V) é uma peroxidase dependente de tiorredoxina que desintoxica o peróxido de hidrogênio e hidroperóxidos orgânicos, ajudando a manter a homeostase redox celular nas mitocôndrias, nos peroxissomos e no citosol. Ao limitar o dano oxidativo a lipídios, proteínas e DNA, a PRX V influencia a função mitocondrial, a sinalização adaptativa ao estresse e vias sensíveis ao estado redox que moldam a inflamação e a sobrevivência celular. Alterações na expressão ou na atividade de PRDX5 têm sido associadas a fenótipos de estresse oxidativo observados na neurodegeneração, na disfunção metabólica, em modelos de lesão cardiovascular e na biologia tumoral, em que espécies reativas de oxigênio modulam a proliferação e a apoptose. Como regulador redox, a PRDX5 é frequentemente estudada por seu papel no controle de limiares de espécies reativas de oxigênio que impactam respostas imunes inatas e a integridade mitocondrial.

PRX V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PRDX5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PRX V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PRDX5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PRDX5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PRX V. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PRDX5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PRX V no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PRX V em células tumorais com expressão de PRDX5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.