Protein C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405598

Panoramica

PROC codifica la proteina C, uno zimogeno di serina proteasi vitamina K–dipendente sintetizzato nel fegato, che circola come regolatore chiave dell’emostasi. Una volta attivata sulla superficie endoteliale dal complesso trombina–trombomodulina, la proteina C attivata inattiva proteoliticamente i cofattori della coagulazione Va e VIIIa, limitando così la generazione di trombina. Questa via anticoagulante è coordinata con il recettore endoteliale della proteina C (EPCR) e la proteina S, collegando il controllo della coagulazione all’infiammazione vascolare e alla funzione di barriera. Alterazioni dell’espressione o della funzione di PROC sono associate a una disregolazione dell’omeostasi coagulativa e a fenotipi di malattia trombotica, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici della segnalazione della coagulazione e della biologia endoteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Protein C (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PROC in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PROC insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PROC a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Protein C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PROC per lo studio della segnalazione di Protein C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PROC critici per la funzione di Protein C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PROC per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Protein C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Protein C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PROC. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Protein C Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Protein C (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PROC per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PROC definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.