protein 4.2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406824

Panoramica

EPB42 codifica la proteina di membrana eritrocitaria 4.2, un adattatore del citoscheletro che stabilizza la membrana dei globuli rossi collegando il complesso band 3 (SLC4A1) alle reti giunzionali spectrina–actina. La proteina 4.2 sostiene la coesione della membrana, la forma biconcava della cellula e la resilienza meccanica durante il passaggio nel microcircolo, integrandosi in vie che regolano l’organizzazione della membrana e l’omeostasi del trasporto ionico. L’alterazione di EPB42 compromette l’integrità della membrana eritrocitaria ed è associata a fenotipi di fragilità dei globuli rossi osservati nei disturbi emolitici ereditari, fornendo un nesso meccanicistico tra l’assemblaggio del citoscheletro e la fisiopatologia legata all’emolisi. Questo gene è quindi ampiamente utilizzato per studiare le interazioni membrana–citoscheletro, la stechiometria dei complessi proteici e le risposte allo stress nella biologia eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO protein 4.2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EPB42 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EPB42 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EPB42 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina protein 4.2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EPB42 per lo studio della segnalazione di protein 4.2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EPB42 critici per la funzione di protein 4.2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EPB42 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal protein 4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal protein 4.2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EPB42. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal protein 4.2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR protein 4.2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EPB42 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EPB42 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.