PRDM5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-427796

Panoramica

Prdm5 codifica PRDM5, un regolatore trascrizionale contenente un dominio PR/SET che modula programmi di espressione genica coinvolti nella differenziazione, nell’organizzazione della matrice extracellulare e nel controllo del ciclo cellulare. PRDM5 è stato collegato alla regolazione epigenetica attraverso interazioni con il macchinario di modifica della cromatina, influenzando la repressione/attivazione trascrizionale nei loci bersaglio. Nei sistemi murini, l’attività di Prdm5 è stata associata a processi di sviluppo del tessuto connettivo e dell’apparato scheletrico, a riflesso del suo ruolo nella regolazione di reti geniche della matrice e di geni strutturali. Un’alterazione della funzione di PRDM5 è stata studiata nel contesto di un controllo della crescita deregolato e di squilibri epigenetici rilevanti per la biologia tumorale e per stati trascrizionali di tipo fibrotico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRDM5 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prdm5 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prdm5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prdm5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRDM5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prdm5 per lo studio della segnalazione di PRDM5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prdm5 critici per la funzione di PRDM5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prdm5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRDM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRDM5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prdm5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRDM5 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRDM5 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prdm5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prdm5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.