PRC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401679-ACT

PRC1 (protein regulator of cytokinesis 1) codifica una proteina associata ai microtubuli che organizza il fuso centrale e il midbody durante la mitosi tardiva, coordinando la formazione della zona mediana del fuso e il completamento della citocinesi. La sua attività è regolata lungo il ciclo cellulare e interseca la segnalazione delle chinasi mitotiche, incluse vie che controllano il fascicolamento dei microtubuli, la progressione dell’anafase e l’abscissione. Un’espressione o una regolazione alterata di PRC1 può perturbare la segregazione cromosomica e la fedeltà della citocinesi, processi collegati all’instabilità genomica e a fenotipi proliferativi osservati in molteplici contesti tumorali. PRC1 è pertanto ampiamente utilizzato come marcatore e nodo meccanicistico per studiare il controllo della mitosi, la tempistica della divisione cellulare e la dinamica dei microtubuli nelle cellule umane.

PRC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRC1 nelle cellule tumorali con espressione di PRC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.