PPP1R26 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411368-ACT

PPP1R26 codifica una proteina regolatoria che si associa ai complessi della protein fosfatasi 1 (PP1), contribuendo a indirizzare l’attività fosfatasica verso specifici substrati e compartimenti subcellulari. Attraverso la modulazione della defosforilazione di serina/treonina, PPP1R26 è in grado di influenzare programmi dipendenti dalla fosforilazione, inclusi la progressione del ciclo cellulare, i processi associati alla cromatina e il controllo trascrizionale. L’alterazione delle reti regolatorie di PP1 può rimodellare la fedeltà della segnalazione e la proteostasi, rendendo PPP1R26 rilevante per studi sulla disregolazione della fosforilazione osservata in diversi contesti patologici. Il suo profilo di espressione e le dinamiche di interazione offrono un utile punto di accesso per analizzare come il targeting di PP1 contribuisca alle transizioni dello stato cellulare.

PPP1R26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPP1R26 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PPP1R26 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPP1R26 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPP1R26, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PPP1R26. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPP1R26 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PPP1R26 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PPP1R26 nelle cellule tumorali con espressione di PPP1R26 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.