Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PP2Cα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422374
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PP2Cα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PP2Cα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PP2Cα Antibody (7F12): sc-517264
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PP2Cα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-422374 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Ppm1a codifica la protein fosfatasi 2C alfa (PP2Cα), una fosfatasi serina/treonina Mg2+/Mn2+-dipendente che agisce come regolatore negativo della segnalazione attivata dallo stress. PP2Cα modula le vie MAPK, incluse le cascate p38 e JNK, defosforilando chinasi chiave e modellando i programmi trascrizionali a valle che governano infiammazione, apoptosi e controllo del ciclo cellulare. Interseca inoltre le risposte al danno al DNA e allo stress metabolico, contribuendo a calibrare durata e ampiezza dei segnali in risposta a stimoli ambientali. Un’attività di PP2Cα deregolata è stata associata a un’alterata segnalazione da stress e a fenotipi oncogenici, sostenendone lo studio in biologia dei tumori, regolazione immunitaria e omeostasi cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PP2Cα (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppm1a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppm1a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppm1a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PP2Cα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppm1a per lo studio della segnalazione di PP2Cα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Ppm1a critici per la funzione di PP2Cα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppm1a per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PP2Cα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PP2Cα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppm1a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PP2Cα Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PP2Cα (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppm1a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppm1a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.