PNP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404914

Panoramica

La purina nucleoside fosforilasi (PNP) è un enzima citosolico della via di recupero delle purine che catalizza la fosforolisi dei nucleosidi inosina e guanosina per generare ipoxantina o guanina, contribuendo così all’omeostasi e al riciclo dei nucleotidi. Controllando l’equilibrio dei metaboliti purinici, la PNP influenza lo stato energetico cellulare, le condizioni redox e la disponibilità di precursori per DNA/RNA, con effetti a valle su proliferazione e risposte allo stress. L’attività della PNP è particolarmente importante nel metabolismo delle cellule immunitarie, dove il flusso di purine modula la sopravvivenza e la funzione dei linfociti. La disregolazione o la carenza ereditaria di PNP è associata a fenotipi di immunodeficienza e a un’alterata accumulazione di metaboliti purinici, rendendola un bersaglio rilevante per studi meccanicistici sulle decisioni di destino cellulare legate al metabolismo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PNP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PNP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PNP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PNP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PNP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PNP per lo studio della segnalazione di PNP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PNP critici per la funzione di PNP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PNP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PNP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PNP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PNP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PNP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PNP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PNP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.