plexin-B2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-431226-LAC

Il gene murino **Plxnb2** codifica la plexina-B2, un recettore transmembrana per le semaforine di classe 4 che coordina la guida assonale, la migrazione cellulare e la morfogenesi tissutale attraverso la segnalazione mediata dalle GTPasi della famiglia Rho. La plexina-B2 integra i segnali delle semaforine con il rimodellamento del citoscheletro e la dinamica dell’adesione, influenzando vie che convergono sulla riorganizzazione dell’actina, sulla regolazione delle piccole GTPasi e sul cross-talk tra recettori nei tessuti in sviluppo e in quelli adulti. Nel sistema nervoso e in altri contesti d’organo, la segnalazione dipendente da PLXNB2 è stata collegata alla regolazione del posizionamento neuronale, della ramificazione e di comportamenti cellulari associati alle barriere, rendendola rilevante per studi sui meccanismi del neurosviluppo e su programmi di motilità deregolati. Le connessioni di questa via supportano inoltre l’indagine di nodi di segnalazione plexina/semaforina implicati in fenotipi invasivi e nelle interazioni con il microambiente in modelli rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale plexin-B2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Plxnb2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale plexin-B2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Plxnb2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di plexin-B2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Plxnb2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.