plasma kallikrein Plasmide Double Nickase (h): sc-402237-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- plasma kallikrein Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h) e il plasma kallikrein Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira KLKB1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
plasma kallikrein Plasmide Double Nickase (h) | sc-402237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
plasma kallikrein Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KLKB1 codifica la callicreina plasmatica, una proteasi a serina centrale nel sistema di attivazione da contatto e nella via callicreina–chinina, dove scinde il chininogeno ad alto peso molecolare per liberare bradichinina e modulare la permeabilità vascolare e la segnalazione infiammatoria. L’attività della callicreina plasmatica interagisce con i processi della coagulazione intrinseca e della fibrinolisi attraverso un’attivazione reciproca con il fattore XII, collegando la proteolisi all’equilibrio emostatico. Una funzione disregolata di KLKB1 è stata associata a un’alterata generazione di bradichinina e alla segnalazione della via da contatto, rilevanti per fenotipi di edema infiammatorio e per meccanismi legati alla trombosi. In quanto proteasi circolante con substrati definiti e inibitori regolatori, la callicreina plasmatica rappresenta un nodo utile per analizzare le cascate proteasiche e la segnalazione derivata dal plasma in contesti endoteliali e immunitari.
plasma kallikrein Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLKB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLKB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLKB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLKB1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.