PKC lambda/iota Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422263-LAC

Il gene murino **Prkci** codifica la proteina chinasi C atipica lambda/iota (PKCλ/ι), una chinasi serina/treonina che funge da componente centrale del complesso di polarità PAR per stabilire la polarità apico–basale e coordinare la divisione cellulare asimmetrica. PKCλ/ι integra segnali regolati da PI3K e da piccole GTPasi per controllare l’organizzazione del citoscheletro, il traffico vescicolare e l’assemblaggio delle giunzioni serrate, contribuendo così all’architettura epiteliale e alla funzione di barriera. Attraverso un controllo dipendente dalla fosforilazione di programmi trascrizionali e regolatori del ciclo cellulare, Prkci influenza proliferazione, differenziamento e sopravvivenza in modo dipendente dal contesto. La disregolazione della polarità e della segnalazione mediata da PKC atipiche è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi tissutale e a fenotipi oncogenici, rendendo Prkci un nodo utile per studiare, in modelli murini, i meccanismi di trasformazione, invasione e difetti dello sviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale PKC lambda/iota (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Prkci in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PKC lambda/iota (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Prkci, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PKC lambda/iota. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Prkci e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.