Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PiT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403121-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PiT1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PiT1 Double Nickase Plasmid (h) e il PiT1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC20A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PiT1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403121-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PiT1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403121-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC20A1 codifica PiT1, un trasportatore di fosfato inorganico (Pi) ad alta affinità e dipendente dal sodio, che sostiene l’assorbimento cellulare di fosfato necessario per la sintesi di ATP, il metabolismo dei nucleotidi e la produzione dei fosfolipidi di membrana. Oltre al trasporto di soluti, PiT1 contribuisce a programmi di omeostasi del fosfato che si intersecano con la segnalazione proliferativa, l’adattamento metabolico e la progressione del ciclo cellulare in diversi tipi cellulari. Un’alterata attività di SLC20A1/PiT1 è stata studiata in contesti quali la disregolazione della gestione dei minerali, processi associati alla calcificazione e fenotipi sensibili al fosfato rilevanti per il cancro e il rimodellamento tissutale. Queste caratteristiche rendono PiT1 un nodo utile per studi meccanicistici sulla segnalazione indotta dal fosfato e sul controllo metabolico nelle cellule umane.
PiT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC20A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC20A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC20A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC20A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.