Pim-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422237-NIC

Mouse Pim1 codifica la chinasi serina/treonina Pim-1, un enzima di segnalazione costitutivamente attivo che modula la sopravvivenza cellulare, la proliferazione e l’adattamento metabolico. Pim-1 fosforila substrati coinvolti nel controllo del ciclo cellulare e dell’apoptosi, inclusi regolatori della traduzione e delle risposte allo stress, e coopera con la segnalazione di fattori di crescita e citochine nel plasmare la funzione delle cellule ematopoietiche e immunitarie. In quanto effettore a valle frequentemente collegato a programmi trascrizionali oncogenici, Pim-1 viene studiato in vie che convergono sull’attività di MYC, sulla sintesi proteica dipendente da mTOR e sulla resistenza allo stress cellulare. Un’attività deregolarizzata di Pim1/Pim-1 è stata associata a trasformazione maligna e progressione tumorale in molteplici sistemi modello, rendendola un bersaglio comune per studi meccanicistici sulla segnalazione delle chinasi e sull’oncogenesi.

Pim-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pim1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pim1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pim1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pim1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.