Peroxin 16 Plasmide Double Nickase (h): sc-411278-NIC

PEX16 codifica la perossina 16, una proteina di membrana perossisomiale che agisce nelle fasi iniziali della biogenesi dei perossisomi coordinando l’assemblaggio della membrana e il reclutamento di ulteriori perossine necessarie alla formazione dell’organello. La perossina 16 sostiene l’istituzione e il mantenimento del compartimento perossisomiale, consentendo vie metaboliche lipidiche chiave come la β‑ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga e la sintesi dei fosfolipidi etere (plasmalogeni), oltre all’omeostasi redox dipendente dai perossisomi. L’alterazione di PEX16 compromette la formazione dei perossisomi e la capacità metabolica a valle, collegando la sua disfunzione ai disturbi della biogenesi perossisomiale con ampie conseguenze cellulari. Poiché i difetti perossisomiali influenzano la segnalazione lipidica, le risposte allo stress ossidativo e il crosstalk tra organelli, PEX16 rappresenta un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in modelli di malattie metaboliche e del neurosviluppo.

Peroxin 16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PEX16 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PEX16. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PEX16. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PEX16 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.