Periostin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400744-ACT

POSTN codifica la periostina, una proteina matricellulare secreta, arricchita nei tessuti connettivi, che si lega a componenti della matrice extracellulare e alle integrine per regolare l’adesione cellulare, la migrazione e il rimodellamento tissutale. La periostina partecipa all’organizzazione della matrice extracellulare e alla meccanotrasduzione, sostenendo la segnalazione attraverso le adesioni focali e vie a valle come FAK/PI3K/AKT e MAPK, che influenzano l’attivazione dei fibroblasti e le interazioni epitelio–mesenchimali. Un’espressione alterata di POSTN è associata al rimodellamento fibrotico e alle risposte tissutali infiammatorie, ed è frequentemente collegata alle dinamiche del microambiente tumorale, inclusi l’espansione dello stroma, segnali pro-angiogenici e la formazione della nicchia metastatica. Queste proprietà rendono la periostina un utile punto di riferimento molecolare per studiare la segnalazione guidata dalla matrice extracellulare e il crosstalk cellula–matrice in modelli rilevanti per la malattia.

Periostin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di POSTN senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Periostin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus POSTN nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione POSTN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Periostin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus POSTN nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Periostin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Periostin nelle cellule tumorali con espressione di POSTN silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.