Per2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422193-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Per2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Per2 Double Nickase Plasmid (m) e il Per2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Per2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Per2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-422193-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Per2 (Period circadian regulator 2) codifica un componente fondamentale dell’orologio circadiano molecolare, che partecipa al circuito di retroazione trascrizionale–traduzionale che controlla l’espressione genica ritmica. PER2 forma complessi con altre proteine dell’orologio per modulare l’attività di CLOCK–BMAL1, plasmando le oscillazioni del metabolismo, della progressione del ciclo cellulare, delle risposte al danno del DNA e della segnalazione neuronale ed endocrina. Alterazioni della funzione di Per2 sono state associate a ritmi circadiani compromessi e a conseguenti cambiamenti nella segnalazione infiammatoria, nell’omeostasi metabolica e nelle vie di risposta allo stress. Nella ricerca biomedica, Per2 è spesso studiato per il suo ruolo nella regolazione tempo-dipendente della fisiologia e per comprendere come la disregolazione circadiana influenzi fenotipi rilevanti per la malattia nei modelli murini.
Per2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Per2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Per2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Per2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Per2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.