PEBP2β Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401983-NIC

CBFB codifica a subunidade beta do fator de ligação ao núcleo (core-binding factor) (PEBP2β), um parceiro que não se liga ao DNA e que forma heterodímeros com fatores de transcrição RUNX para estabilizar a ligação ao DNA e regular programas transcricionais necessários para a hematopoiese, a osteogênese e a diferenciação de células imunes. Por meio dos complexos RUNX/CBF, o CBFB influencia a expressão gênica específica de linhagem, o controle do ciclo celular e o padrão de desenvolvimento, conectando-se a vias que coordenam proliferação e diferenciação. A disrupção ou rearranjo de CBFB altera a fidelidade da transcrição e está associada à biologia de malignidades hematológicas, tornando CBFB um nó-chave para o estudo de bloqueios de diferenciação e de regulação transcricional aberrante. Seu papel como cofator de RUNX também oferece uma estrutura para investigar alvos a jusante e mecanismos associados à cromatina que controlam o comprometimento de linhagem.

PEBP2β O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CBFB em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CBFB. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CBFB. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CBFB interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.