PEBP2β Plasmide Double Nickase (h): sc-401983-NIC

CBFB codifica la subunità beta del core-binding factor (PEBP2β), un partner privo di legame diretto al DNA che eterodimerizza con i fattori di trascrizione RUNX per stabilizzare il legame al DNA e regolare programmi trascrizionali necessari per l’ematopoiesi, l’osteogenesi e la differenziazione delle cellule immunitarie. Attraverso i complessi RUNX/CBF, CBFB influenza l’espressione genica specifica di linea, il controllo del ciclo cellulare e la definizione dei pattern di sviluppo, collegandosi a vie che coordinano proliferazione e differenziazione. L’alterazione o il riarrangiamento di CBFB compromette la fedeltà trascrizionale ed è associato alla biologia delle neoplasie ematologiche, rendendo CBFB un nodo chiave per studiare i blocchi di differenziazione e la regolazione trascrizionale aberrante. Il suo ruolo di cofattore di RUNX fornisce inoltre un quadro di riferimento per interrogare i bersagli a valle e i meccanismi associati alla cromatina che controllano l’impegno di linea.

PEBP2β Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CBFB nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CBFB. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CBFB. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CBFB interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.