Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PDE5A Plasmide Double Nickase (m): sc-433880-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDE5A Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDE5A Double Nickase Plasmid (m) e il PDE5A Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pde5a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDE5A Antibody (D-3): sc-398747
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDE5A Plasmide Double Nickase (m) | sc-433880-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDE5A Plasmide Double Nickase (m2) | sc-433880-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Pde5a** codifica la fosfodiesterasi 5A (PDE5A), una fosfodiesterasi specifica per il cGMP che termina la segnalazione ossido nitrico–cGMP idrolizzando il cGMP a GMP. Controllando i livelli intracellulari di cGMP, PDE5A regola l’attività della protein chinasi G (PKG) e i processi a valle, inclusi il tono della muscolatura liscia, la reattività vascolare, la funzione piastrinica e la segnalazione nei cardiomiociti. L’attività di PDE5A si integra con le vie dei peptidi natriuretici e della guanilato ciclasi solubile, plasmando il cross-talk dei nucleotidi ciclici che influenza l’omeostasi cellulare. Alterazioni dell’espressione di PDE5A o squilibri della via del cGMP sono stati studiati in modelli di rimodellamento cardiovascolare, disfunzione vascolare polmonare e regolazione neurovascolare.
PDE5A Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pde5a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pde5a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pde5a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pde5a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.