PC-PLD3 Plasmide Double Nickase (h): sc-406631-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PC-PLD3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PC-PLD3 Double Nickase Plasmid (h) e il PC-PLD3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PLD3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PC-PLD3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-406631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PC-PLD3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-406631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PLD3 (membro 3 della famiglia della fosfolipasi D) codifica una proteina transmembrana di tipo II, arricchita nei compartimenti endolisosomiali e implicata nel metabolismo dei lipidi di membrana e nel traffico vescicolare. PC-PLD3 è stata collegata alla regolazione della funzione endosoma–lisosoma, della proteostasi e della processazione di substrati associati alla membrana, processi che intersecano l’omeostasi neuronale e la segnalazione dell’immunità innata. Studi genetici e di espressione hanno associato PLD3 al rischio di malattie neurodegenerative e ad alterazioni delle vie amiloidogeniche, rendendola un bersaglio di interesse in modelli di stress neuronale, disfunzione lisosomiale e patologia legata all’età. Nei sistemi cellulari, la perturbazione di PLD3 può essere utilizzata per indagare come i meccanismi dipendenti da lipidi e vescicole modellino il turnover proteico e gli output di segnalazione.
PC-PLD3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PLD3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PLD3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PLD3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PLD3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.