Pbx 2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402015-ACT

PBX2 codifica il fattore di trascrizione homeobox della classe TALE Pbx2, un cofattore legante il DNA che interagisce con le proteine HOX e MEIS per definire programmi di espressione genica nello sviluppo e mantenere l’identità cellulare. Attraverso questi complessi, PBX2 contribuisce alla regolazione trascrizionale associata alla cromatina, influenzando differenziamento, proliferazione e impegno di linea in molteplici tessuti. Un’attività di PBX2 deregolata e reti trascrizionali HOX–PBX alterate sono state collegate a programmi trascrizionali oncogenici e a contesti di progressione tumorale, a supporto del suo studio nella biologia del cancro e nella regolazione genica dello sviluppo. PBX2 è anche utilizzato come nodo per analizzare la cooperatività tra fattori di trascrizione e la “logica” degli enhancer nelle cellule umane.

Pbx 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PBX2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Pbx 2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PBX2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PBX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Pbx 2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PBX2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Pbx 2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Pbx 2 nelle cellule tumorali con espressione di PBX2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.