PARP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400046-NIC

PARP1 codifica la poli(ADP-ribosio) polimerasi 1, un enzima nucleare che rileva le rotture a singolo filamento del DNA e catalizza la poli(ADP-ribosil)azione di sé stessa e di altre proteine associate alla cromatina, coordinando la riparazione del DNA e il rimodellamento della cromatina. PARP1 svolge un ruolo di primo piano nella riparazione per escissione di basi e nella riparazione delle rotture a singolo filamento, e si integra con le risposte allo stress replicativo, la regolazione trascrizionale e le vie di stabilità del genoma attraverso il reclutamento di proteine e il rilassamento della cromatina. Un’attività o un’espressione alterata di PARP1 è associata a difetti nella segnalazione del danno al DNA, accumulo di mutazioni e deregolazione della sopravvivenza cellulare sotto stress genotossico, rendendola un nodo ampiamente studiato nei modelli di trasformazione oncogenica e di risposta alle terapie. PARP1 è inoltre oggetto di studio in ambito neurodegenerativo e infiammatorio, dove il danno persistente al DNA e il metabolismo del PAR possono influenzare il destino cellulare e i programmi di espressione genica.

PARP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PARP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PARP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PARP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PARP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.