Paralemmin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422109

Panoramica

Palm codifica la paralemmin, una fosfoproteina associata alla membrana, arricchita nei neuroni, che regola la dinamica della membrana plasmatica, la formazione dei filopodi e la crescita dei neuriti attraverso un’impalcatura ancorata ai lipidi a livello della corteccia cellulare. La paralemmin partecipa al rimodellamento del citoscheletro e ai processi di maturazione sinaptica che modellano la connettività neuronale e la plasticità dipendente dall’attività. Nel topo, l’espressione di Palm è collegata al patterning dello sviluppo dei prolungamenti neuronali e all’organizzazione delle spine dendritiche, associandola a vie che governano il traffico di membrana, il rimodellamento dell’actina e la struttura delle sinapsi. Un’architettura di membrana e sinaptica associata alla paralemmin alterata è stata studiata nel contesto di fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, in cui connettività modificata e morfologia delle spine sono comuni parametri di lettura sperimentali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Paralemmin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Palm in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Palm insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Palm a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Paralemmin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Palm per lo studio della segnalazione di Paralemmin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Palm critici per la funzione di Paralemmin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Palm per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Paralemmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Paralemmin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Palm. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Paralemmin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Paralemmin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Palm per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Palm definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.