Plasmide CRISPR d'Activation (h) PAI-2: sc-402054-ACT

SERPINB2 code pour l’inhibiteur de l’activateur du plasminogène-2 (PAI‑2), un inhibiteur de protéases à sérine qui module la protéolyse péricellulaire en inhibant l’activateur du plasminogène de type urokinase (uPA/PLAU), influençant ainsi la génération de plasmine et le remodelage de la matrice extracellulaire. PAI‑2 est induit par des signaux inflammatoires et est fréquemment étudié dans les monocytes/macrophages, les cellules épithéliales et les microenvironnements tumoraux, où il s’inscrit à l’interface entre fibrinolyse, réponse aux lésions et réseaux de signalisation pilotés par les cytokines. En régulant les processus liés à l’axe uPA/uPAR, SERPINB2 influence la migration et l’adhérence cellulaires, ainsi que des cascades de signalisation dépendantes des protéases pertinentes pour le remodelage tissulaire et l’activation immunitaire. Des altérations de l’expression de SERPINB2/PAI‑2 ont été associées à des pathologies inflammatoires et à des phénotypes liés au cancer, ce qui en fait un nœud mécanistique utile dans les études de la protéostasie et du remodelage couplé à l’inflammation.

PAI-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SERPINB2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PAI-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SERPINB2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SERPINB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PAI-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SERPINB2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PAI-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PAI-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SERPINB2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.