p73 Plasmide Double Nickase (h): sc-416822-NIC

TP73 codifica p73, un fattore di trascrizione della famiglia di p53 che regola il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e i programmi di differenziamento in risposta allo stress cellulare e a segnali dello sviluppo. Attraverso attività specifiche per isoforma, p73 influenza la segnalazione del danno al DNA, l’apoptosi mitocondriale e le reti trascrizionali che governano l’integrità epiteliale e lo sviluppo neurale. La funzione di p73 interseca vie quali le risposte mediate da ATM/ATR e la coregolazione all’interno della famiglia di p53, determinando esiti che includono senescenza e sopravvivenza. Un’espressione deregolata di TP73 o uno squilibrio tra isoforme è stata associata a processi oncogenici, fenotipi neurosviluppativi e a un’alterata adattabilità allo stress, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale.

p73 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus TP73 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di TP73. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di TP73. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con TP73 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.