Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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p53 Plasmide Double Nickase (m): sc-423509-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p53 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p53 Double Nickase Plasmid (m) e il p53 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Trp53. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: p53 Antibody (A-1): sc-393031
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p53 Plasmide Double Nickase (m) | sc-423509-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
p53 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-423509-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Trp53 codifica p53, un fattore di trascrizione specifico per sequenza che integra i segnali di danno al DNA e di stress oncogenico per mantenere la stabilità del genoma. p53 regola l’arresto del ciclo cellulare, l’apoptosi, la senescenza e i programmi di riparazione del DNA attraverso vie che includono la segnalazione ATM/ATR–CHK1/CHK2 e il controllo trascrizionale di bersagli quali Cdkn1a (p21), Bax e Mdm2. L’alterazione di Trp53 compromette il controllo dei checkpoint e le reti trascrizionali indotte dallo stress, rendendolo un elemento centrale negli studi sulla biologia dei soppressori tumorali, sulla tolleranza alle mutazioni e sulle risposte cellulari allo stress genotossico. Nei modelli murini, lo stato di Trp53 influenza in modo marcato la trasformazione, la sorveglianza immunitaria e l’omeostasi tissutale, supportando indagini meccanicistiche nei processi legati al cancro e all’invecchiamento.
p53 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trp53 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trp53. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trp53. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trp53 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.