p38 alpha MAPK14 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400057-ACT

MAPK14 codifica p38 alfa, una chinasi proteica attivata dallo stress appartenente alla famiglia delle MAPK (mitogen-activated protein kinases), che integra segnali provenienti da citochine, stress osmotico, irradiazione UV e stimoli associati ai patogeni per regolare la trascrizione, la stabilità dell’mRNA e la traduzione proteica. p38 alfa/MAPK14 agisce nella cascata MAPK a valle di MKK3/MKK6 e modula effettori come ATF2, ELK1, MAPKAPK2/3 e HSP27, contribuendo a plasmare la segnalazione infiammatoria, il controllo del ciclo cellulare, la differenziazione e l’apoptosi. È un nodo chiave delle vie dell’immunità innata e dell’infiammazione, incluse le vie di segnalazione TNF, IL-1 e TLR, e influenza il crosstalk con NF-κB e con i programmi responsivi all’interferone. Un’attività deregolata di MAPK14 è stata implicata nell’infiammazione cronica, nelle risposte allo stress neurodegenerativo, nel rimodellamento cardiovascolare e in molteplici fenotipi associati al cancro, rendendolo un bersaglio ampiamente studiato per la mappatura delle vie di segnalazione e la genomica funzionale.

p38 alpha MAPK14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK14 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p38 alpha MAPK14 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK14 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p38 alpha MAPK14. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK14 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p38 alpha MAPK14 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p38 alpha MAPK14 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK14 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.