P2X7 Plasmide Double Nickase (h): sc-400780-NIC

Il gene umano **P2RX7** codifica il recettore purinergico **P2X7**, un canale cationico attivato dall’ATP che collega i segnali di pericolo extracellulari al flusso di ioni, alla permeabilizzazione della membrana e alle successive risposte infiammatorie. L’attivazione di P2X7 promuove l’ingresso di **Ca²⁺/Na⁺** e l’efflusso di **K⁺**, sostenendo l’attivazione dell’inflammasoma **NLRP3**, la maturazione di **IL-1β** e la **piroptosi**, influenzando anche la generazione di **ROS**, l’**autofagia** e l’adattamento metabolico. Attraverso questi processi, P2X7 collega la segnalazione purinergica all’attivazione delle cellule immunitarie, al rilascio di citochine e alle vie di morte cellulare nei compartimenti mieloide e linfoide. Un’attività e una segnalazione di P2RX7 deregolate sono state associate a infiammazione cronica, processi neuroinfiammatori e modulazione del microambiente tumorale–immunitario, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici dell’immunità innata e della segnalazione da stress.

P2X7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus P2RX7 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di P2RX7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di P2RX7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con P2RX7 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.