Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide Double Nickase (h): sc-404267-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickase Plasmid (h) e il P/Q-type Ca++ CP α1A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CACNA1A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: P/Q-type Ca++ CP α1A Antibody (C-2): sc-390004
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide Double Nickase (h) | sc-404267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P/Q-type Ca++ CP α1A Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CACNA1A codifica la subunità α1A formante il poro del canale del calcio voltaggio-dipendente di tipo P/Q (CaV2.1), un importante mediatore dell’ingresso di Ca2+ nei neuroni dipendente dall’attività. L’apertura del canale accoppia la depolarizzazione di membrana al rilascio di neurotrasmettitori e modella i pattern di scarica regolando i microdomini presinaptici di calcio e l’esocitosi delle vescicole sinaptiche. L’attività di CaV2.1 si integra con vie di segnalazione calcio-dipendenti, inclusa la modulazione mediata dalla calmodulina e le reti a valle di chinasi/fosfatasi che regolano finemente la plasticità sinaptica. La variabilità genetica o la disfunzione di CACNA1A è associata a fenotipi di malattie neurologiche che coinvolgono alterazioni dell’eccitabilità e della trasmissione sinaptica, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sulla funzione dei circuiti neuronali.
P/Q-type Ca++ CP α1A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CACNA1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CACNA1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CACNA1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CACNA1A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.