OTUB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-430702-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OTUB1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OTUB1 Double Nickase Plasmid (m) e il OTUB1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Otub1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: OTUB1 Antibody (J-61): sc-130458
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OTUB1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-430702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OTUB1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Otub1** codifica **OTUB1**, una deubiquitinasi della famiglia dei tumori ovarici (OTU) che rimodella l’architettura delle catene di ubiquitina e sopprime la segnalazione dipendente dall’ubiquitina. OTUB1 regola la proteostasi e le risposte allo stress modulando l’ubiquitinazione legata a K48 e K63, con ruoli ben descritti nella risposta al danno del DNA tramite la regolazione della segnalazione dell’ubiquitina in corrispondenza delle rotture a doppio filamento. Modellando il flusso delle vie mediate dall’ubiquitina, OTUB1 influenza la progressione del ciclo cellulare, la stabilità del genoma e gli output della segnalazione infiammatoria. Un’attività deregolata di OTUB1 è stata associata a segnalazioni aberranti in vie rilevanti per il cancro e a processi immunitari e neurobiologici alterati, a supporto del suo studio in contesti di modellizzazione delle malattie.
OTUB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Otub1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Otub1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Otub1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Otub1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.