OTOP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423421

Panoramica

Otop1 codifica OTOP1, una proteina di membrana multipasso che funziona come canale ionico selettivo per i protoni e contribuisce al rilevamento e alla regolazione del pH cellulare. Nel topo, l’attività di OTOP1 è collegata alla fisiologia vestibolare e alla biomineralizzazione degli otoconi, processi che dipendono da microambienti ionici strettamente controllati e dalla deposizione di carbonato di calcio. Modulando il flusso di protoni attraverso le membrane, OTOP1 può influenzare l’omeostasi acido-base e gli eventi di segnalazione a valle sensibili al pH extracellulare e intracellulare. La deregolazione della gestione dei protoni dipendente da OTOP1 è stata associata a difetti dell’equilibrio e della funzione dell’orecchio interno, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla biologia sensoriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OTOP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Otop1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Otop1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Otop1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OTOP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Otop1 per lo studio della segnalazione di OTOP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Otop1 critici per la funzione di OTOP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Otop1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OTOP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OTOP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Otop1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OTOP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OTOP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Otop1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Otop1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.