ORNT1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422074

Panoramica

Slc25a15 codifica il trasportatore mitocondriale dell’ornitina ORNT1, un membro della famiglia di trasportatori SLC25 che media lo scambio di ornitina attraverso la membrana mitocondriale interna. Nel topo, ORNT1 supporta il ciclo dell’urea fornendo ornitina mitocondriale per la carbamoilazione e facilitando il flusso citrullina/ornitina accoppiato all’eliminazione dell’azoto e al catabolismo degli amminoacidi. Questa attività di trasporto collega il metabolismo mitocondriale alla gestione citosolica dell’azoto, influenzando le reti metaboliche legate all’arginina e alle poliammine. La disregolazione del trasporto di ornitina e del flusso del ciclo dell’urea è associata a fenotipi metabolici correlati all’iperornitinemia e può influire sulle risposte cellulari allo stress da azoto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ORNT1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc25a15 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc25a15 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc25a15 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ORNT1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc25a15 per lo studio della segnalazione di ORNT1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc25a15 critici per la funzione di ORNT1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc25a15 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ORNT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ORNT1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc25a15. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ORNT1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ORNT1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc25a15 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc25a15 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.