OATP-H Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404706-ACT

SLCO4C1 umano codifica OATP-H, un polipeptide trasportatore di anioni organici appartenente alla superfamiglia dei carrier di soluti (SLC), che media l’assorbimento sodio-indipendente di diversi metaboliti endogeni e composti di tipo xenobiotico attraverso le membrane cellulari. Regolando l’ingresso e la distribuzione cellulare di anioni organici anfipatici, OATP-H contribuisce all’omeostasi metabolica guidata dai trasportatori e influenza l’esposizione dei tessuti a piccole molecole circolanti. I pattern di espressione di SLCO4C1 e l’attività del trasportatore si intersecano con vie che governano la detossificazione, le risposte allo stress cellulare e la gestione farmacocinetica in contesti di barriera ed escrezione. Alterazioni nella regolazione di SLCO4C1 sono state investigate in relazione a fenotipi renali e cardiometabolici e come modificatore della suscettibilità tessuto-specifica a fattori di stress chimici e infiammatori.

OATP-H Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di SLCO4C1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OATP-H Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus SLCO4C1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione SLCO4C1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OATP-H. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus SLCO4C1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OATP-H nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OATP-H nelle cellule tumorali con espressione di SLCO4C1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.