OAT3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422696

Panoramica

Slc22a8 codifica il trasportatore di anioni organici 3 (OAT3), un trasportatore di captazione basolaterale polispecifico che media l’importazione cellulare di diversi metaboliti endogeni e di anioni organici xenobiotici. Nel tubulo prossimale del rene murino, OAT3 sostiene la secrezione vettoriale accoppiando la captazione dal sangue ai trasportatori di efflusso apicali a valle, influenzando la clearance renale e l’esposizione sistemica a molte piccole molecole. Agendo sullo scambio di anioni organici e sulla gestione intracellulare dei metaboliti, OAT3 contribuisce all’omeostasi dei soluti e si interseca con vie coinvolte nel trasporto tubulare, nel destino delle tossine uremiche e nella suscettibilità alla nefrotossicità. Alterazioni dell’attività di OAT3 sono state implicate nei meccanismi di danno renale e nella variabilità farmacocinetica, rendendo Slc22a8 un locus utile per modellare fenotipi dipendenti dai trasportatori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OAT3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Slc22a8 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Slc22a8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Slc22a8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OAT3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Slc22a8 per lo studio della segnalazione di OAT3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Slc22a8 critici per la funzione di OAT3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Slc22a8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OAT3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal OAT3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Slc22a8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OAT3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR OAT3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Slc22a8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Slc22a8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.