NUDT8 Plasmide Double Nickase (m): sc-425987-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NUDT8 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NUDT8 Double Nickase Plasmid (m) e il NUDT8 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nudt8. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NUDT8 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425987-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nudt8 codifica NUDT8, un membro della famiglia delle idrolasi Nudix implicato nella “bonifica” del pool cellulare di nucleotidi attraverso l’idrolisi di derivati difosfato dei nucleotidi potenzialmente mutageni o attivi nella segnalazione. Regolando l’abbondanza di nucleotidi ossidati o non canonici, NUDT8 può influenzare la fedeltà della replicazione del DNA, le risposte allo stress associate al redox e le vie del metabolismo dei nucleotidi che intersecano l’omeostasi mitocondriale e perossisomiale. Una sanificazione dei nucleotidi deregolata è ampiamente rilevante per l’instabilità genomica e per fenotipi di stress infiammatorio, rendendo Nudt8 un bersaglio utile per esplorare i meccanismi che collegano lo stato metabolico alla suscettibilità al danno del DNA. Studi su Nudt8 nel topo possono aiutare a chiarire i ruoli tessuto-specifici degli enzimi Nudix nella gestione dello stress ossidativo e nel controllo qualità degli acidi nucleici.
NUDT8 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nudt8 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nudt8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nudt8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nudt8 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.