NSUN2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405097-ACT

NSUN2 (NOP2/Sun RNA metiltransferasi 2) codifica una RNA metiltransferasi della citosina-5 che installa m5C su diversi substrati di RNA, inclusi tRNA e mRNA, influenzando così stabilità, processamento e traduzione dell’RNA. Questa attività epitranscrittomica dell’RNA si interseca con la biogenesi dei ribosomi, la progressione del ciclo cellulare e i programmi di risposta allo stress attraverso la modulazione della sintesi proteica e del metabolismo dell’RNA. La metilazione dipendente da NSUN2 è collegata al controllo della proliferazione e della differenziazione cellulare; alterazioni di questo processo sono associate a fenotipi di neurosviluppo e a programmi di crescita deregolati osservati in molteplici contesti patologici. Di conseguenza, NSUN2 è spesso studiato nell’ambito di vie che governano il controllo qualità dell’RNA, la regolazione della traduzione e il rimodellamento dell’espressione genica in risposta allo stress.

NSUN2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NSUN2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NSUN2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NSUN2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NSUN2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NSUN2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NSUN2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NSUN2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NSUN2 nelle cellule tumorali con espressione di NSUN2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.