NSD3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402721-ACT

NSD3 (noto anche come WHSC1L1) codifica una metiltransferasi nucleare delle lisine istoniche con dominio SET, che funge da regolatore della cromatina di programmi trascrizionali legati all’identità cellulare e alla proliferazione. Depositando marcatori di metilazione sugli istoni e coordinandosi con altri cofattori epigenetici, NSD3 contribuisce all’organizzazione dei nucleosomi, all’attività degli enhancer e all’espressione genica dipendente dalla RNA polimerasi II. La deregolazione di NSD3 è stata associata a stati della cromatina alterati osservati in molteplici tumori, inclusi contesti con amplificazione di 8p11 e dipendenza trascrizionale aberrante. Queste proprietà rendono NSD3 un bersaglio utile per studiare il controllo epigenetico della segnalazione oncogenica, i programmi di lignaggio e la regolazione genica mediata dalla cromatina nelle cellule umane.

NSD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NSD3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NSD3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NSD3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NSD3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NSD3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NSD3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NSD3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NSD3 nelle cellule tumorali con espressione di NSD3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.