Nrl Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402610-ACT

NRL (neural retina leucine zipper) codifica o fator de transcrição Nrl, um regulador do tipo “basic leucine zipper” que desempenha um papel central no desenvolvimento dos fotorreceptores e no estabelecimento da identidade das células bastonete. Ao ligar-se a elementos cis-regulatórios e coordenar redes transcricionais com outros fatores da retina, o Nrl controla programas envolvidos na fototransdução, na formação do segmento externo e na homeostase metabólica em neurônios diferenciados. A desregulação da expressão gênica associada ao NRL está ligada a doenças hereditárias da retina e à disfunção de fotorreceptores, tornando o NRL um nó útil para estudar circuitos de regulação gênica na biologia da retina. Assim, a atividade do Nrl humano é relevante para investigações sobre diferenciação neuronal, especificação de destino celular e controle transcricional na retina.

Nrl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NRL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Nrl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NRL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NRL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Nrl. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NRL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Nrl no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Nrl em células tumorais com expressão de NRL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.