NQO2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402200-ACT

Il gene umano NQO2 (NRH:quinone ossidoreduttasi 2) codifica una flavoproteina citosolica che catalizza la riduzione a due elettroni dei chinoni e di elettrofili correlati, influenzando l’equilibrio redox cellulare e la capacità di detossificazione. Modulando il ciclo dei chinoni e la formazione di specie reattive dell’ossigeno, NQO2 si inserisce nelle risposte allo stress ossidativo, nel metabolismo degli xenobiotici e, più in generale, nelle reti redox dipendenti da NAD(P)H. Alterazioni nell’espressione e nell’attività di NQO2 sono state associate a fenotipi legati a stress metabolico, infiammazione e suscettibilità cellulare al danno mediato da elettrofili, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sull’adattamento allo stress. Nella ricerca in biologia del cancro e in neurobiologia, NQO2 viene spesso analizzato nel contesto dell’omeostasi redox, della sensibilità al danno al DNA e di cambiamenti di segnalazione guidati da metaboliti elettrofili.

NQO2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NQO2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NQO2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NQO2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NQO2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NQO2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NQO2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NQO2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NQO2 nelle cellule tumorali con espressione di NQO2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.