Nop14 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-408567

Panoramica

NOP14 codifica Nop14, una proteina nucleolare necessaria per la biogenesi dei ribosomi e per la maturazione dell’rRNA 18S attraverso l’assemblaggio e il processamento della piccola subunità ribosomiale. Partecipa alla formazione di particelle preribosomiali e supporta l’organizzazione del nucleolo, collegando il processamento dell’rRNA al controllo della crescita cellulare e alla proteostasi. L’alterazione di NOP14 può compromettere la capacità di traduzione e le risposte allo stress nucleolare, processi che si intrecciano con la regolazione del ciclo cellulare e con i checkpoint associati a p53. Programmi alterati di biogenesi ribosomiale che coinvolgono NOP14 sono stati studiati nei disturbi proliferativi e nella biologia del cancro, nell’ambito di una più ampia deregolazione del processamento dell’RNA e dei segnali di crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nop14 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NOP14 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NOP14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NOP14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nop14.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NOP14 per lo studio della segnalazione di Nop14, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NOP14 critici per la funzione di Nop14
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NOP14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nop14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nop14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NOP14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nop14 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nop14 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NOP14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NOP14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.