Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Plasmide Double Nickase (h): sc-404001-NIC

CHRND codifica la subunità delta del recettore nicotinico dell’acetilcolina (nAChR) di tipo muscolare, un canale cationico pentamerico regolato da ligando, concentrato nella membrana postsinaptica della giunzione neuromuscolare. In seguito al legame dell’acetilcolina, il recettore si apre consentendo il flusso di Na⁺ e K⁺, determinando la depolarizzazione della placca motrice e accoppiando la trasmissione sinaptica alla contrazione del muscolo scheletrico. La funzione di CHRND è integrata con le vie che governano l’assemblaggio e la maturazione della sinapsi, incluse la segnalazione agrina–LRP4–MuSK, il clustering dei recettori e la loro stabilizzazione mediata da rapsina e da scaffold associati. Alterazioni genetiche delle subunità del nAChR muscolare, incluso CHRND, sono associate a disturbi della trasmissione neuromuscolare come le sindromi miasteniche congenite, rendendo questo gene rilevante per studi meccanicistici sull’eccitabilità sinaptica e sulla biogenesi dei recettori.

Nicotinic Acetylcholine Receptor delta/CHRND Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CHRND nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CHRND. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CHRND. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CHRND interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.