Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401641

Panoramica

CHRNB2 codifica la subunità β2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), canali cationici regolati da ligando che si assemblano come pentameri eteromerici con subunità α per regolare l’eccitabilità di membrana. In seguito al legame di acetilcolina o nicotina, gli nAChR contenenti β2 mediano l’ingresso di Na⁺ e Ca²⁺, collegando la segnalazione colinergica a vie calcio-dipendenti che influenzano il rilascio di neurotrasmettitori, la plasticità sinaptica e lo sviluppo dei circuiti. L’attività di CHRNB2 si interseca con i processi che regolano ricompensa, attenzione e arousal attraverso la modulazione di reti dopaminergiche e di altri sistemi neuromodulatori. Alterazioni genetiche e funzionali di CHRNB2 sono state associate a fenotipi neuropsichiatrici e a una maggiore suscettibilità alle crisi, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici in modelli neuronali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CHRNB2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CHRNB2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CHRNB2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CHRNB2 per lo studio della segnalazione di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CHRNB2 critici per la funzione di Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CHRNB2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CHRNB2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nicotinic Acetylcholine Receptor beta 2/CHRNB2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CHRNB2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CHRNB2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.